柴胡种子DNA分子鉴定规程_团体标准_食品团体标准网

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本文件规定了柴胡种子DNA分子鉴定的实时荧光PCR技术原理方法和操作规程。本文件适用鉴定中药材北柴胡和狭叶柴胡种子的真实性。
基于实时荧光PCR技术，建立多重实时荧光PCR检测体系，采用DNA条形码中的ITS基因序列为靶基因，设计柴胡的通用引物与探针以及狭叶柴胡和北柴胡的特异性引物和探针，通过对荧光聚合酶链式反应反应体系和反应条件的优化筛选，建立了多重实时荧光聚合酶链式反应方法，在同一聚合酶链式反应反应体系中可以同时鉴别狭叶柴胡、北柴胡种子的源性成分。 DNA提取：每份材料混合取0.3g，用灭菌后的研钵在液氮状态下研磨成粉末。将含有2%β-巯基乙醇的CTAB提取缓冲液置于65℃水浴锅中预热；将研磨好的样品取0.15g置于2.0

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